Изобретение и уникальность способа производства субстанций, примененных при создании ключевой молекулы «CYC-8» препарата OYOX, относится к области медицины, биофизике, фармацевтике, а именно к технологическому способу повышения активности субстанций, используемых в составе лекарственных средств, биологически активных добавок и лечебного питания. Сущность изобретения составляет способ повышения эффективности и вследствие этого расширения показаний для профилактического и лечебного применения препарата, содержащего циклоастрагенол , путем его обработки слабым комбинированным магнитным полем (КМП), настроенным в режиме параметрического резонанса на такие мишени, как атомы, ионы, ядра или электронные оболочки ядер биологически важных элементов, в первую очередь металлов. Готовый фармакологически активный экстракт, содержащий более 10% связанной воды и не менее 1000 мкг кальция на грамм воздушно-сухого образца, экспонирутеся 20-30 мин в фокусе комбинированного магнитного поля, включающего переменное магнитное поле, колинеарное постоянному магнитному полю Земли, при амплитуде переменного магнитного поля в диапазоне 1 - 200 мкТесла и соотношении амплитуда/частота, рассчитываемом по формуле Бесселевой функции, для режима параметрического резонанса, настроенного на ионы кальция или соответствующую ларморовскую частоту спинов ядер других биологически важных элементов.
Изобретение представляет новое практическое использование параметрического резонанса комбинированного магнитного поля (КМП), позволяющего точно установить количественные характеристики переменного магнитного поля (ПМП), его амплитуду, направленность относительно постоянного магнитного поля (МП) Земли в месте экспозиции обрабатываемого объекта, фокусировать в рабочей зоне, задавать соотношение амплитуда/частота в соответствии с физической природой первичной мишени для формирования нужной ответной реакции конкретного биологического объекта, то есть изменения его свойств. Теоретическая и экспериментальная основа изобретения являются результатом многолетних исследований, в которых установлено, что КМП, настроенные в режиме параметрического резонанса на такие мишени, как ионы кальция (Ca2+-КМП), калия (K+-КМП) и атомы водорода существенно по-разному влияют на активность ферментных систем растений и животных, функциональную активность, скорость регенерации тканей животных, пролиферацию стволовых клеток in vivo и in vitro. Активирующее воздействие обеспечивалось экстремально точной настройкой на ионы кальция (Ca2+-КМП), тормозящий эффект - настройкой на ионы калия (K+-КМП).
Новизна настоящего технологического решения заключается в том, что впервые c помощью слабого менее 0.2 мТесла КМП, настроенного в режиме параметрического резонанса, обрабатывается «законсервированный», полученный из биологического объекта сухой экстракт, находящийся в составе фармакологически средства, а не активно функционирующий биологический объект. Воздействие осуществлялось с помощью усовершенствованного нами устройства — «магнитотрона», принцип устройства которого позволяет настраивать параметры ПМП строго с расчетными требованиями. Объект помещают в центр сфокусированного КМП при регулировании величины амплитуды и частоты ПМП таким образом, чтобы соотношение амплитуда/частота соответствовало резонансной характеристике, рассчитываемой для конкретной мишени по формуле для Бесселовой функции. В представленном изобретении резонансный характер амплитудно-частотной зависимости ответной реакции биологического объекта наиболее четко проявляется при использовании в качестве первичной мишени действия слабого КМП на ионы Са2+ как заряженный изотропный осциллятор.
Для реализации предложенного способа следующим образом подбиралась готовая фармацевтическая форма экстракта Астрагала перепончатого (Циклоастрагенол), содержащая не менее 78% действующей субстанции. При этом экстракт должен был содержать в связанном с субстанцией виде более 10-15% воды от общего веса и порядка 1000 мкг на грамм воздушно-сухой массы образца. Такой препарат сохраняет близкое к нативному состоянию водное окружение субстанции и естественную связь кальция с субстанцией, окруженной гидратной оболочкой. Обработка препарата параметрическим резонансным КМП, настроенным на ионы кальция, продолжается 20-30 минут. После предложенной обработки препарат экстракта приобретает в среднем на 30% более высокую активность, которая сохраняется в течение как минимум 2 лет при обычных условиях хранения (вне действия высокоамплитудных электромагнитных полей или сильного постоянного магнитного поля и без дополнительного высушивания экстракта). Достигнутый результат подтвержден экспериментальными и клиническими данными, свидетельствующими об устойчивом изменении активности препарата после обработки Са2+-КМП. Обозначенные условия хранения необходимо соблюдать, чтобы в объекте не уменьшилось ниже критического уровня количество связанной воды в гидратной оболочке или не произошла ее кристаллизация, и чтобы экстракт не обрабатывался таким образом, который приведет к извлечению из него ионов кальция.
Препарат, полученный после 36 часов обработки исходного («полужидко-кристаллического» - переведенного в гелеобразное состояние) экстракта Ca2+-КМП, оказывал статистически значимое влияние на лабораторных животных в виде:
- ускорения течения процесса рубцевания раны – эпителизация и рубцевание наступали в среднем на 3-4 дня быстрее;
- увеличения содержание лимфоцитов на 5% и отношения лимфоциты/нейтрофилы с исходного уровня 4,0-4,3 до 7-8 на фоне неизмененного общего количества лейкоцитов (порядка 8-9 тыс. в мкл) в периферической крови животных (свидетельство развития стадии активации по Гаркави и др. и повышения резистентности организма в целом;
- прироста соотношения CD4/CD8 на 7-9% в лейкоцитах периферической крови (активации теломеразы – один из признаков позитивного влияния на продолжительность жизни особи);
- прироста цитобиохимически определяемой активности сукцинатдегидрогеназы (маркера митохондрий) в иммобилизованных на мазке лимфоцитах периферической крови в среднем на 70±15%, что отражает увеличение вклада аэробной митохондриальной энергетики в обеспечения функций клеток (последнее характерно для здоровых клеток крови, не подвергаемых онкогенной трансформации).
Эффект обработки Ca2+-КМП сохранялся после высушивания препарата до исходного содержания влаги (порядка 15%) и прослеживался на том же уровне в течение года. Высушивание производилось таким образом, чтобы не нарушить гидратную оболочку и сохранить измененное состояние ионов кальция в обработанном КМП экстракте.
Исходный экстракт – готовая форма обработанного препарата была предложена (после подписания информированного согласия и оформления дополнительного медицинского страхования с испытуемыми) 33 практически здоровым добровольцам: без обострения каких-либо имевшихся ранее заболеваний, не страдающим гипертонической болезнью, ишемической болезнью сердца с признаками стенокардии покоя, не имеющих диагноза сахарного диабета 2 типа, в возрасте 48-92 лет. В начале исследования и по окончании исследовалась периферическая кровь добровольцев, артериальное давление (АД), ЭКГ и частота сердечных сокращений (ЧСС). Подъемы АД и ЧСС измеряли каждый день: пароксизмов нарушения ритма или тахикардии у добровольцев зарегистрировано не было. Клеточный состав периферической крови, ни показатели стандартного биохимического анализа крови не претерпевали выходящих за рамки диапазона физиологической возрастной нормы отклонений как в группе контроля (15 человек, получавших согласно инструкции курс препарата, не обработанного КМП), так и в «опытной» группе (18 добровольцев, получавших согласно инструкции курс препарата, подвергнутого обработке КМП).
Однако у добровольцев «опытной» наблюдались при этом следующие сдвиги в измеряемых характеристиках. Количество лимфоцитов возрастало на 40-60% по сравнению с исходным. По этому параметру люди чувствительнее животных, по-видимому, не только в связи с видовыми особенностями крыс, но и потому что у лабораторных животных, содержащихся в условиях комфортного вивария, получающих сбалансированный рацион при ритмичном кормлении, с регулярной чисткой клеток, четким режимом светового дня, в отсутствии каких-либо стрессовых воздействий, наблюдается исходно намного более высокий лимфоидный статус, чем у человека. У крыс доля лимфоцитов составляет 80-85% от общего числа лейкоцитов, то есть число лимфоцитов выше количества нейтрофильных лейкоцитов. Тогда как у человека количество лимфоцитов в среднем в 1,7 – 2,0 раза меньше количества циркулирующих в крови нейтрофилов. На таком фоне в среднем доля лимфоцитов возрастала на 40-60% от исходного уровня: то есть со среднего уровня в 25% до 35% после приема обработанного экстракта.
В контрольной группе добровольцев, принимавших не обработанный КМП экстракт, также наблюдался статистически значимый подъем относительного содержания лимфоцитов, но не более, чем 20%. При этом сдвиг отношения CD4/CD8 в позитивную сторону (признак увеличения теломеразной активности) у людей менее выражен, чем у животных, хотя в экспериментальной группе по парному критерию Вилкоксона был статистически значим.
Значительно показательнее оказался прирост активности цитобиохимически определяемой активности сукцинатдегидрагеназы (СДГ) в иммобилизованных на мазке лимфоцитах периферической крови у добровольцев «опытной» группы. В контрольной группе после курса приема обычного экстракта обнаружена выраженная тенденция к увеличению этого показателя (порядка + 50%), но она не имела статистической значимости из-за большого индивидуального разброса результатов, характерного для различных людей. В «опытной» группе прирост достигал +80% и более и потому, несмотря на индивидуальный разброс, был статистически значимым. Интересно, что при этом величина формазановой окраски в пробе с малонатом, отражающей уровень одноэлектронных утечек в дыхательной цепи (образование активных форм кислорода на уровне митохондрий), изменялась неоднозначно в обеих группах в зависимости от исходного состояния, но более четко и выраженно в «опытной группе». У добровольцев, имевших исходно высокую активность малонат-выявляемого уровня АФК-зависимой окраски формазана, после курса обработанным КМП препаратом интенсивность окраски резко снижалась в 2-3 раза (торможение избыточного образования АФК).
И, напротив, с исходно практически нулевой окраской в присутствии малоната (также не лучшая ситуация), после курса обработанного КМП препарата наблюдалось статистически значимое приращение окраски до уровня, характерного для молодых здоровых людей. Оба отмеченных на уровне митохондрий лимфоцитов сдвига могут быть связаны с тем , что обработанный препарат в большей степени способствует активации митохондриальной аэробной энергетики и восстановлению соотношения парного и одноэлектронного переноса в дыхательной цепи. В нашем случае наблюдалась практически нормализация образования АФК: повышенный уровень снижался до нормального и, напротив, резко сниженный восстанавливался до уровня, характерного для здоровых молодых людей. Регуляторное, поддерживающее активность ферментов митохондрий действие может быть обусловлено функционированием известного регуляторного каскада, включаемого активными сиртуинами 1 , 3 и 6 посредством воздействия на транснкрипционный фактор PGC1α, который контролирует синтез и активность ферментов окислительного фосфорилирования и дыхательной цепи митохондрий.
Анализ совокупности данных по изменению параметров, определяющих скорость старения и инволюции клеток, а также повышение активности митохондриальной системы, обнаруженное даже на уровне форменных элементов крови, дает основание полагать, что курс приема OYOX способствует существенной стабилизации и повышению уровня регуляторных деацилирующих регуляторов – сиртуинов. В первую очередь это касается сиртуинов 1 ,3 и 6. Безусловно, в той или иной мере, в зависимости от конкретного состояния человека могут реализоваться 9 широко обсуждаемых позитивных эффектов OYOX. Препятствие старению организма, противовирусное действие, регуляция активности иммунной системы, предотвращение фиброзного перерождения паренхиматозных органов, бактериостатический эффект, положительное действие на уровень глюкозы в крови при сахарном диабете первого и второго типов, уменьшение вероятности развития и прогрессирования ожирения, радиопротекторное-радиомитигаторное и, наконец, противоопухолевое действие.
Наблюдаемое ускорение выполнения теста связи чисел после курса приема обработанного КМП «CYC-8» в препарате OYOX хорошо укладывается в современные представления и соответствует данным о его влиянии на умственные способности после нейродегенеративного поражения, вызванного инсультом. После 2 месяцев приема OYOX когнитивные функции человека имеют тенденцию к возрастанию обьема краткосрочной и долгосрочной памяти на 9-11% соответственно.
Есть веские основания полагать, что это связано с сиртуиновой активацией митохондриогенеза, поскольку структуры головного мозга наиболее чувствительны к повышению уровня активности митохондриальной энергетики. И именно поддержание митохондриальной энергетики препятствует прогрессированию и развитию практически всех видов нейродегенеративных изменений в головном мозге, в том числе при болезни Паркинсона, Альцгеймера и атеросклеротическом поражении сосудов мозга.
Таким образом на уровне животных и человека (как воспринимающей системы) показано, что молекула «CYC-8» , сохраняющая практически нативную гидратную оболочку вокруг биологически активной растительной субстанции и катионов кальция, меняется по своим свойствам под воздействием параметрического резонансного КМП, настроенного на ионы кальция. При этом биологическая активность препарата возрастает.
Обычно низкую активность сиртуинового ряда связывают с различными возрастными заболеваниями и более ранней смертностью. Таким образом, длина теломер лейкоцитов (LTL) и активность сиртуинов SIRT1, 3, 6 становятся как биомаркерами, так и фактором, способствующим возрастным заболеваниям. Тем не менее, ни одно клиническое исследование не рассматривало непосредственно активность сиртуинов и длину теломер в разных подтипах лимфоцитов, выделенных от одних и тех же доноров, что могло бы дать представление о суммарной оценке содержания теломер в лейкоцитах.
Первые количественные данные у людей, изучающие как уровни активности сиртуинов, так и длину теломер в четырех субпопуляциях лимфоцитов от одних и тех же доноров - CD4 +, CD8 + CD28 + и CD8 + CD28 - Т-клеток и В-клеток, а также полных РВМС - в когорте здоровых женщин.
Мы обнаружили, что В-клетки обладали самой высокой сиртуиновой активностью и самой длинной длиной теломер;
CD4 + T-клетки обладали несколько большей сиртуиновой активностью, чем CD8 + CD28 + T-клетки, и имели сходную длину теломер. В соответствии с более ранними сообщениями о том, что CD8 + CD28- Т-клетки являются репликативно стареющими клетками, они имели самую низкую активность теломеразы и самую короткую длину теломер.
Кроме того, более высокий процент CD8 + CD28- Т-клеток коррелировал с более коротким общим TL PBMC (r = - 0,26, р = 0,05).
Сиртуиновая активность CD4 + и CD8 + CD28 + Т-клеток одного и того же индивида была сильно коррелирована (r = 0,55, r <0,001), что указывает на возможные общие механизмы регуляции активности SIRT1; 3; 6 в этих двух клеточных подтипах. Эти данные помогают понять старение лейкоцитов и их связь со здоровьем человека.
